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技術(shù)文章

家禽中激素含量的液相色譜儀測定

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一.儀器

  液相色譜儀,紫外檢測器;離心機旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;K-D濃縮器。

二.試劑

  激素標(biāo)準(zhǔn)貯備液:分別稱取雌三醇、雌二醇、雌酮、睪酮、孕酮0.1000g,用甲醇溶解并定容至100mL,每毫升含各種激素均為1.000mg。

  激素標(biāo)準(zhǔn)使用液:精密吸取一定量的激素標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)貯備液,用甲醇配制成每毫升含各種激素為10.00μg、an眠酮2.00μg和每毫升含各種激素2.00μg、an眠酮2.00μg的兩種標(biāo)準(zhǔn)使用液。

三.實驗步驟

  1.樣品的處理

  取可食部分,搗成均漿,稱取50g左右置250mL具塞三角瓶中。在上述樣品中加入按眠酮20.00μg/mL的內(nèi)標(biāo)貯備液1.0mL,加甲醇+丙酮(1+1)混合溶液150mL,在振蕩器上振搖提取30min。用快速濾紙過濾,殘渣用少量甲醇+丙酮(1+1)混合液洗滌數(shù)次,洗液并入濾液中,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或K-D濃縮器中將溶劑蒸除。殘渣用甲醇20mL溶解,經(jīng)盛有無水硫酸鈉的漏斗濾入250mL分液漏斗中,再用10mL甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌漏斗及內(nèi)容物,洗液并入濾液中,加pH=5.2的醋酸鈉緩沖液80mL左右,混勻后二氯甲烷50mL、30mL、30mL振搖提取3次。合并提取液并用無水硫酸鈉脫水,在水浴上揮干溶劑,殘渣用甲醇溶解并定容至10.0mL,混勻后,以3000r/min速度離心5min,取上清液供色譜分析用。

  2.液相色譜參考條件 

  ① 色譜柱:HP-ODS 4.6mm×200mm。

  ② 流動相:乙腈+甲醇+四氫呋喃+0.01mol/L 醋酸鈉溶液(20+20+10+50)。

  ③ 流速:1.0mL/min。

  ④ 測定波長:270nm。

  ⑤ 進(jìn)樣體積:10μL。

  3.樣品測定

  取供色譜測定的樣品溶液10μL,注入液相色譜儀,以內(nèi)標(biāo)法定量。

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